我们的目标是去除目标蛋白和最少量的非目标蛋白。多克隆抗体用来确保结合特性。我们评估了柱的结合特性,并发现与传统蛋白去除产品相比,多重亲和排除系统是最适合高丰度目标蛋白的去除设备。
- 从洗脱组分中对结合蛋白用胰蛋白酶进行胶内消解和 LC/MS/MS 分析表明,阿朴脂蛋白-A1、补体 C3 和补体 C4 是在结合组分中检测到的仅有非目标蛋白。这些非目标蛋白的结合表示只有一小部分穿透量。
- ELISA 结果表明 99% 以上的目标蛋白都被亲合柱去除掉。
- 用于结合和洗脱的流动相的组成(缓冲液 A)已公式化,以将不被抗体作为目标蛋白的去除量减至最少。
- 在任何条件下,如果低丰度蛋白伴随着已捕获的高丰度蛋白,则可以通过在结合组分中收集它们而将其容易地回收,然后可以进一步分析。